明膠酶譜法檢測試劑盒-2022動態(tài)已更新《采購/推薦》

發(fā)布時間： 2022-11-15　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1010次

明膠酶譜法檢測試劑盒-信帆生物《采購/推薦》

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理1和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測

染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝

膠，并緩慢搖動2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h，也可脫色過夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景）；

4. 對凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對

凝膠進(jìn)行處理后保存。

安全性：含有甲醇，無特殊毒性，按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。

說明：

1. 染色液配方：0.25g 考馬斯亮藍(lán)R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸，定容至1000ml，混合1h 后用

Whatman 1 號濾紙過濾，于室溫可無限期保存；

2. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；