關于血清的細胞培養基礎知識

1.血清必須貯存于–20～–70℃，若存放于4℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中，由于血清結凍時體積會增加約10%， 必須預留此膨脹體積之空間，否則易發生污染或容器凍裂之情形。

2. 一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發現血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養基內一起過濾，勿直接過濾血清。

3.瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：–20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沈淀。

4. heat-inactivation 是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過程中須規則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補體成份(complement)去活化。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。

補體參與之反應有：cytolyticactivities,contraction of smooth muscle, release of histamine frommast cellsand platelets, enhanced phagocytosis, chemotaxis andactivation oflymphocytic and macrophage cell type。

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5.勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質。

6. 血清之沉淀物

6.1.凝絮物：發生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin)造成，這些凝絮沉淀物不會影響血清本身之品質。若欲減少這些凝絮沉淀物，可用離心3000rpm,5min去除，或離心后上清液可以加入培養基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。

6.2.顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經過熱處理之血清，沉淀物的形成會顯著的增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在37℃中欲培養此“微生物“，但在37℃環境下，又會使此沉淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養細 菌之培養基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質，應立即停用，更換另一批號的血清。