ITRAQ/TMT標記定量蛋白質組學

服務介紹：

　　蛋白質組學(Proteomics)指的是大規模、高通量地研究一個細胞、組織或物種中表達的全套蛋白質的學科。近十年來，質譜技術的飛速發展大大推動了的蛋白質組學的進步，基于質譜的蛋白質組學已經成為蛋白質研究領域技術手段。通過蛋白質組學技術可以對生物樣本中的蛋白質、翻譯后修飾位點(如磷酸化)進行大規模地鑒定或定量，進而從高通量的數據分析中挖掘有價值的信息和規律，為功能機制的探究提供線索和基礎。2003年，人類基因組計劃(HGP)完成精細圖的繪制后，同年，人類蛋白質組學計劃(HPP)隨即開展起來，反映了科研領域對蛋白質組學的重視。經過十年時間，多家單位的共同努力下，人類蛋白質組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

iTRAQ技術是美國應用生物系統(AB SCIEX)公司與2004年推出的一種全新的體外同重同位素標記的相對與絕對蛋白組定量技術。該同位素標記法利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端和賴氨酸側鏈基團，經高精度質譜儀串聯分析，可同時比較多達8種樣品之間的蛋白表達量，能夠高通量地尋找不同蛋白質組的差異蛋白并且準確進行相對或絕對定量，是近年來定量蛋白質組學中應用廣泛的高通量篩選技術。

　　實驗流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—肽段標記富集—高分辨質譜檢測采集數據—數據庫檢索—數據整理分析

　　送樣運輸要求：

　　1、蛋白樣本

　　①蛋白量大于100ug，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②建議測定蛋白濃度后，液氮速凍，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度，方便實驗室收到后進行后續處理。

　　③膠條、膠點樣本不建議進行定量蛋白質組學。

　　2、細胞樣本

　　①細胞量1x10⁷個，收集細胞沉淀，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養基成分，然后離心去除上清保存。

　　3、血清樣本

　　①樣本量500uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②樣本應盡量避免溶血。

　　4、血漿樣本

　　①樣本量500uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②樣本應盡量避免溶血。

　　5、尿液樣本

　　①樣本量2mL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②樣品應盡量避免帶入糞便殘渣。

　　6、動物組織樣本

　　①樣本量300mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液沖洗表面血液，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　7、植物組織樣本

　　①樣本量500mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　8、微生物樣本

　　①樣本量干重200mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養基成分，然后離心去除上清保存。

ITRAQ/TMT標記定量蛋白質組學